Повышен фактор 8. Специфическая удельная активность

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Вводится впервые

Настоящая фармакопейная статья распространяется на методы определения активности факторов системы свертывания крови человека I, II, VII, VIII, IX, X, XI, фактора Виллебранда, антитромбина III в плазме и препаратах крови.

ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

Определение активности факторов свертывания базируется на 2 подходах:

1. Одностадийный метод. Восстановление процесса свертывания крови в дефицитной по фактору плазме после добавления препарата этого фактора (клоттинговый метод).
2. Двухстадийный метод. На первой стадии с использованием специфического кофактора активируется протеолитическая активность фактора II или фактора X с образованием соответственно активированного фактора IIa или Xa. На второй стадии количество образовавшегося активированного фaктора определяют по реакции расщепления им специфического хромогенного пептида (хромогенный метод).

Возможно проведение хромогенного метода 2 способами: по кинетике образования хромогена под действием активированного фактора или по конечной точке накопления хромогена за определенное время инкубации.

Для проведения обоих методов возможно использование пластиковых пробирок, планшетов, оптико-механических, механических полуавтоматических и полностью автоматизированных коагулометров.

Во всех методах расчет активности производят при сравнении активности тестируемого образца с активностью Международного стандарта NIBSC или вторичного стандартного образца фактора свертывания, откалиброванного относительно международного стандарта в международных единицах активности (МЕ). Эквивалентность международного стандарта в МЕ устанавливается ВОЗ. За 1 МЕ (100%) принимают активность фактора свертывания в 1,0 мл свежей нормальной пулированной плазме крови от 300 доноров. Активность может быть выражена в МЕ/мл, МЕ/флакон, МЕ/мг белка и в % от заявленного производителем количества.

ФАКТОРЫ

Фактор I (фибриноген)

Клоттинговый метод

Определение активности фибриногена проводят методом Клаусса.

Принцип метода

При добавлении тромбина к образцу, содержащему фибриноген, наблюдается образование сгустка фибрина. При использовании тромбина с высокой активностью (~10 МЕ/мл) и образцов с низкой концентрацией фибриногена (ниже 100 мг/дцл) можно получить линейную зависимость.

Для определения фибриногена используют коммерческие тестовые системы, в состав которых входит реагент тромбина, содержащий ингибитор гепарина, и буфер для разведения образцов или коммерческий тромбин-реагент.

Концентрация фибриногена выражается в мг/дцл. Для построения калибровочного графика используют стандартный образец фибриногена или аттестованную по международному стандарту плазму-калибратор. Стандартный образец или образец плазмы-калибратора растворяют в дистиллированной воде согласно инструкции. Готовят 5 последовательных разведений стандартного образца, начиная с концентрации ~ 100 мг/дцл, с помощью буфера для разведения образцов pH = 7,3±0,1. Анализ проводят при температуре 37°С согласно инструкции к набору. Для каждого разведения трижды определяют время образования сгустка. По полученным результатам в логарифмических координатах строят калибровочный график зависимости времени образования сгустка от концентрации фибриногена.

Готовят 2 разведения испытуемого образца с концентрацией ниже 100 мг/дцл. Для каждого разведения время образования сгустка определяют трижды. Количество фибриногена в каждом разведении определяют по калибровочному графику.

Фактор II (тромбин)

1. Клоттинговый метод

Определение активности фактора II проводят с использованием в качестве субстрата человеческой плазмы, дефицитной по фактору II. Процесс свертывания активируется добавлением к смеси кальция тромбопластина.

Для разведения стандарта и препаратов используют NaCl-имидазоловый буфер pH 7,3±0,1 с добавлением 0,1% бычьего или человеческого альбумина. Для построения калибровочного графика готовят серию последовательных разведений стандарта фактора II в интервале активности от 0,3 до 1 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации менее 1 МЕ/мл. Анализируют 3 разведения препарата. Для каждого образца измерение времени свертывания проводят минимум 2 раза. Измерение проводят в течение 1 ч после разведения препарата.

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку вносят 50 мкл плазмы, дефицитной по фактору II, и 50 мкл разведения стандарта или препарата. Смесь инкубируют при (37 ± 0,5)°С в течение 120 – 240 с. Время свертывания определяют с момента добавления к смеси 200 мкл предварительно нагретого до температуры (37±0,5)°С кальция тромбопластина. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции.

Калибровочный график строят в полулогарифмических координатах. По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора II, по оси ординат – время свертывания соответствующих разведений стандарта. Активность фактора II для каждого разведения испытуемого образца находят по калибровочному графику. Активность FII (А

k

1. Хромогенный метод

Метод основан на сравнении ферментативной активности фактора IIа, образованного после специфической активации фактора II, в отношении специфического хромогенного пептидного субстрата с такой же активностью стандартного образца (международного или аналогичного).

Фактор II активируется с помощью активатора экарина, выделенного из яда гадюки. Активированный фактор II (тромбин) селективно расщепляет хромогенный субстрат (H-D-фенилаланин-L-пипеколил-L-аргинин-4-нитроанилида дигидрохлорид, 4-толуолсульфонилглицил-пролил-L-аргинин-4-нитроанилид, H-D-циклогексилглицил-α-аминобутирил-L-аргинин-4-нитроанилид, D-циклогексилглицил-L-аланил-L-аргинин-4-нитроанилида диацетат) с образованием п -нитроанилина. Кинетику реакции исследуют фотометрическим методом при 405 нм. При этом значение оптической плотности пропорционально активности фактора II.

Определение фактора II хромогенным методом осуществляют с помощью специальных тестовых наборов. Анализ выполняется в соответствии с инструкцией к набору. Стандартный образец и препарат предварительно разводят плазмой, дефицитной по фактору II, до концентрации ~ 1 МЕ/мл (основное разведение). Из основного разведения готовят 3 разведения стандартного образца и 3 разведения препарата трис-солевым буферным раствором рН 8,4. Каждое разведение стандартного образца определяют двухкратно, полученные значения используют для построения калибровочного графика. Испытуемые образцы определяют трехкратно.

Испытания проводят в ручном режиме с использованием микропланшет и спектрофотометра, поддерживающего температуру в диапазоне (37±0,5)°C или в автоматическом режиме с использованием коагулометра.

Для проведения испытаний в ручном режиме в лунки микропланшета вносят по 25 мкл каждого разведения испытуемого препарата или стандартного образца. В каждую лунку прибавляют по 125 мкл буфера для разведения, по 25 мкл экарина и инкубируют при температуре (37±0,5)°C в течение 2 мин. По истечении времени инкубации в каждую лунку вносят по 25 мкл хромогенного субстрата фактора IIа.

А /мин).

Если непрерывное измерение оптической плотности невозможно, определяют оптическую плотность при длине волны 405 нм через последовательные интервалы времени (например, через 40 с) и строят график зависимости оптической плотности от времени и рассчитывают ∆А А

1. Тест на отсутствие тромбина

Для испытаний готовят восстановленный в соответствии с инструкцией раствор препарата. При наличии в препарате гепарина его нейтрализуют добавлением протамина сульфата из расчета 10 мкг протамина сульфата на 1 МЕ гепарина.

Приготовление раствора фибриногена

0,3 г фибриногена растворяют в 100 мл, перемешивают и выдерживают 15 – 20 мин при комнатной температуре.

Срок хранения раствора 1 мес при температуре от 2 до 8°С.

Приготовление раствора тромбина

Лиофилизат растворяют в соответствии с инструкцией производителя, выдерживают 15 – 20 мин при комнатной температуре и разводят 0,9% раствором натрия хлорида до содержания тромбина 1 МЕ/мл.

Срок хранения раствора 6 мес при температуре минус 20°С. Раствор после оттаивания повторному замораживанию не подлежит.

Ход определения

В 2 пробирки вносят равные объемы восстановленного препарата и раствора фибриногена. В третью пробирку (контрольная проба) вносят равные объемы раствора тромбина и раствора фибриногена, перемешивают содержимое пробирок вращательными движениями. Одну пробирку с восстановленным препаратом инкубируют на водяной бане с температурой 37°C в течение 6 ч, другую пробирку с восстановленным препаратом – при комнатной температуре в течение 24 ч. Отмечают наличие или отсутствие коагуляции (сгустка).

Контрольную пробу инкубируют на водяной бане при температуре 37°C и отмечают время образования сгустка.

Критерием приемлемости результатов является коагуляция в контрольной пробе через 30 с.

Фактор VII

1. Клоттинговый метод

Определение активности фактора VII проводят с использованием человеческой плазмы, дефицитной по фактору VII. Процесс свертывания активируется добавлением к смеси кальция тромбопластина.

Для разведения стандарта и препаратов используют NaCl-имидазоловый буфер pH 7,3 с добавлением 0,1% раствора альбумина человеческого или бычьего. Для построения калибровочного графика готовят серию последовательных разведений стандарта образца фактора VII в интервале от 0,3 до 1 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации менее 1 МЕ/мл. Анализируют 3 разведения препарата. Для каждого образца измерение времени свертывания проводят минимум 2 раза. Измерение проводят непосредственно после разведения препарата.

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку вносят 50 мкл плазмы, дефицитной по фактору VII и 50 мкл разведения стандарта или препарата. Смесь инкубируют при (37±0,5)°С в течение 120 – 240 с. Время свертывания определяют с момента добавления к смеси 200 мкл предварительно прогретого до температуры (37±0,5)°С кальция тромбопластина. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции.

Калибровочный график строят в полулогарифмических координатах. По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора VII, по оси ординат – время свертывания соответствующих разведений стандарта. Активность фактора VII для каждого разведения испытуемого образца находят по калибровочному графику. Активность FVII (А ) в исследуемом образце рассчитывают по формуле:

— активность соответствующего разведения исследуемого образца, найденная по калибровочному графику;

k — разведение исследуемого образца.

1. Хромогенный метод

В присутствии тканевого фактора (TF) и ионов Ca 2+ происходит активация фактора VII (образование FVIIa). Комплекс FVIIa, TF, Ca 2+ и фосфолипида активирует фактор X. Активированный фактор X (FXa) селективно расщепляет хромогенный субстрат FXa-1 метоксикарбонил-D-циклогексилаланил-глицил-L-аргинин-n -нитроанилид-ацетат с образованием п -нитроанилина. Исследование образца проводят фотометрическим методом при 405 нм. Значение оптической плотности (или увеличение поглощения) пропорционально количеству фактора VII.

Определение фактора VII хромогенным методом осуществляют с помощью специальных тестовых наборов. Анализ выполняется в соответствии с инструкцией к набору. Стандартный образец и препарат предварительно разводят плазмой, дефицитной по фактору VII, до концентрации ~ 1 МЕ/мл (основное разведение). Из основного разведения готовят с помощью буферного раствора 3 разведения стандартного образца и 3 разведения препарата трис-солевым буфером рН 7,3 – 8,0 с добавлением 0,1% человеческого или бычьего альбумина. Каждое разведение стандартного образца определяют двухкратно, полученные значения используют для построения калибровочного графика. Испытуемые образцы определяют трехкратно.

В лунки микропланшет вносят разведения испытуемого препарата или стандартного образца, добавляют кальций-тромбопластиновую смесь, раствор фактора Х и инкубируют при температуре (37± 0,5)°C от 2 до 5 мин, после чего вносят раствор хромогенного субстрата фактора Ха.

Измеряют изменение оптической плотности при длине волны 405 нм либо в кинетическом режиме, либо прерывают реакцию гидролиза через 3 — 15 мин добавлением 20% (об/об) раствора уксусной кислоты ледяной и измеряют оптическую плотность.

Фактор VIII

1. Клоттинговый метод

Определение активности фактора VIII проводят с использованием человеческой плазмы, дефицитной по фактору VIII. Источником фосфолипидов, необходимых для осуществления свертывания, является АЧТВ-реагент.

Для разведения стандарта и препаратов используют NaCl-имидазоловый буферный раствор pH (7,3±0,1), с добавлением 0,1% раствора человеческого или бычьего альбумина. Для построения калибровочного графика готовят серию последовательных разведений стандарта, начиная от концентрации 2 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации ~ 0,5 – 2 МЕ/мл. Анализируют 3 разведения препарата. Для каждого образца измерение времени свертывания проводят минимум 2 раза. Измерение проводят в течение 1 ч после разведения препарата.

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку вносят 100 мкл плазмы, дефицитной по фактору VIII, 100 мкл разведения стандарта или препарата и 100 мкл АЧТВ-реагента и инкубируют при температуре (37±0,5)°С в течение 2 мин. Время свертывания фиксируют с момента прибавления к смеси 100 мкл предварительно прогретого до температуры (37 ± 0,5)°С 0,025 М раствора кальция хлорида. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции.

Калибровочный график строят в полулогарифмических координатах. По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора VIII, по оси ординат – время свертывания соответствующих разведений стандарта. Активность фактора VIII для каждого разведения испытуемого образца находят по калибровочному графику. Активность FVIII (А ) в исследуемом образце рассчитывают по формуле:

— активность соответствующего разведения исследуемого препарата, найденная по калибровочному графику;

k — разведение исследуемого образца.

1. Хромогенный метод

Количественное определение фактора VIII проводят с помощью набора реактивов, в котором фактор VIII является кофактором для фактора IХа при активации фактора Х в форму Ха, расщепляющего хромогенный субстрат.

Принцип метода

В присутствии ионов Са 2+ и фосфолипидов фактор Х под действием фактора IХа активируется в Ха. При избытке фактора Х и оптимальных количеств Са 2+ , фосфолипидов и фактора IХа скорость активации фактора Х линейно зависит от количества фактора VIII. Фактор Ха гидролизует хромогенный субстрат S-2765 (N-a-Z-DArg-Gly-Arg-pNA) с высвобождением хромогенной группы pNA, окраску которой регистрируют спектрофотометрически при 405 нм. Количество образовавшегося фактора Ха и, следовательно, интенсивность окрашивания, пропорциональны активности фактора VIII в образце.

Набор реактивов для определения активности фактора VIII стабилен в течение срока, указанного производителем при температуре хранения от 2 до 8 о С.

Набор реактивов содержит:

1. 7,7 мг хромогена S-2765 с добавкой синтетического ингибитора тромбина I-2581. Реактив восстанавливают в 6,0 мл стерильной воды для инъекций. Восстановленный раствор стабилен в течение 1 мес при температуре от 2 до 8°С. Перед использованием нагревают до температуры 37°С.
2. Реактив бычьих факторов: 0,3 Ед фактора IХ, 2,7 МЕ фактора Х и 1 NIH Ед тромбина, лиофилизированных в присутствии 40 ммоль СаCl 2 и 0,2 ммоль фосфолипидов. Реактив восстанавливают в 2,0 мл стерильной воды для инъекций. Восстановленный раствор стабилен в течение 12 ч при температуре от 2 до 8 о С, 2 нед при температуре минус 30 о С и 1 мес при температуре минус 80 о С. Не следует хранить при температуре минус 20 о С. Перед использованием нагревают до температуры 37 о С.
3. Концентрат ×10 трис-буфера. Стабилен в течение 1 мес при температуре от 2 до 8°С. Перед употреблением разводят стерильной водой для инъекций в соотношении 1:10.

Дополнительные реактивы:

1. Международный стандартный образец — раствор концентрата фактора свертывания VIII человека (NIBSC, Eur.Pharm.Ref.Std. BRP H 0920000) или плазма, откалиброванная по международному стандарту фактора VIII.
2. Контрольная нормальная или патологическая плазма, откалиброванная по международному стандарту фактора VIII.
3. 0,9% раствор натрия хлорида.
4. 20% уксусная кислота или 2% лимонная кислота (используются в методике конечной точки накопления хромогена).
5. Вода лабораторная деионизованная

Оборудование:

1. Пластиковые пробирки;
2. Микропланшеты;
3. Термостат 37 о С;
4. Спектрофотометр 405 нм или ридер микропланшет 405 нм;
5. Калиброванные пипетки;
6. Вортекс;
7. Секундомер.

Исследуемый образец перед определением разводят до ожидаемой активности 1 МЕ/мл.

Определение можно проводить в кинетическом режиме и по конечной точке, в пробирках (макрометод) и в микропланшетах (микрометод).

Калибровка

При проведении каждого определения проводят построение калибровочной кривой. Разведение стандартного образца готовят в 2 этапа: предварительное разведение до активности 1 — 2 МЕ/мл и конечные разведения для построения калибровочной зависимости в диапазоне 0 – 2 МЕ/мл. После разведения определение следует провести в течение 30 мин.

Ход определения

Определение в пробирках

200 мкл разбавленного стандартного, контрольного или исследуемого образца вносят в пробирки, инкубируют в течение 3-4 мин при температуре 37 о С, прибавляют 50 мкл предварительно прогретого реактива факторов, инкубируют в течение 2-4 мин при температуре 37 о С и прибавляют 50 мкл раствора хромогена.

Определение в микропланшетах

В лунки микропланшета вносят по 50 мкл разбавленного стандартного, контрольного или исследуемого образца, инкубируют в течение 3-4 мин при 37°С, прибавляют 50 мкл предварительно прогретого реактива факторов, инкубируют в течение 2-4 мин при температуре 37 о С и прибавляют 50 мкл раствора хромогена.

Кинетический метод определения

После прибавления раствора хромогена в течение 2 — 10 мин измеряют изменение оптической плотности раствора при 405 нм.

Определение по конечной точке

После прибавления раствора хромогена смесь продолжают инкубировать при температуре 37 о С в течение 2 — 10 мин, после чего для остановки реакции прибавляют 50 мкл 20% уксусной или 2% лимонной кислоты. Измеряют оптическую плотность раствора против буфера при 405 нм.

Расчеты

Строят зависимость изменения оптической плотности в минуту (для кинетического метода) или оптической плотности (для определения по конечной точке) разведений стандартного раствора от концентрации в них фактора VIII. Активность в исследуемом образце определяют по калибровочной кривой с учетом предварительного разведения образца.

Фактор IX

1. Клоттинговый метод

Определение активности фактора IX проводят с использованием человеческой плазмы, дефицитной по фактору IX. Источником фосфолипидов, необходимых для осуществления свертывания, является АЧТВ-реагент.

Для разведения стандарта и препаратов используют NaCl-имидазоловый буферный pH 7,3 с добавлением 0,1% раствора бычьего или человеческого альбумина. Для построения калибровочного графика готовят серию последовательных разведений стандарта в интервале от 0,3 до 1 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации менее 1 МЕ/мл. Анализируют 3 разведения препарата. Для каждого образца измерение времени свертывания проводят минимум 2 раза. Измерение проводят в течение 1 ч после разведения препарата.

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку вносят 100 мкл плазмы, дефицитной по фактору IX, 100 мкл разведения стандарта или препарата и 100 мкл АЧТВ-реагента и инкубируют при температуре (37± 0,5)°С в течение 2 мин. Время свертывания фиксируют с момента прибавления к смеси 100 мкл предварительно прогретого до температуры (37 ± 0,5) °С 0,025 М раствора кальция хлорида. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции.

Калибровочный график строят в полулогарифмических координатах. По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора IX, по оси ординат – время свертывания соответствующих разведений стандарта. Активность фактора IX для каждого разведения испытуемого образца находят по калибровочному графику. Активность FIX (А ) в исследуемом образце рассчитывают по формуле:

— активность соответствующего разведения исследуемого образца, найденная по калибровочному графику;

k — разведение исследуемого образца.

Фактор X

1. Клоттинговый метод

Определение активности фактора X проводят с использованием человеческой плазмы, дефицитной по фактору X. Процесс свертывания активируется добавлением к смеси кальция тромбопластина.

Для разведения стандарта и препаратов используют NaCl-имидазоловый буферный раствор pH 7,3 с добавлением 0,1% раствора человеческого или бычьего альбумина. Для построения калибровочного графика готовят серию последовательных разведений стандарта фактора X в интервале от 0,3 до 1 МЕ/мл. Препарат разводят до концентрации менее 1 МЕ/мл. Анализируют 3 разведения препарата. Для каждого образца измерение времени свертывания проводят минимум 2 раза. Измерение проводят непосредственно после разведения препарата.

Анализ проводят при температуре (37±0,5)°С. В пластиковую пробирку вносят 50 мкл плазмы, дефицитной по фактору X, и 50 мкл разведения стандарта или препарата. Смесь инкубируют при (37±0,5)°С в течение 120 – 240 с. Время свертывания определяют с момента добавления к смеси 200 мкл предварительно прогретого до температуры (37±0,5)°С кальция тромбопластина. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут варьироваться в соответствующей пропорции.

Калибровочный график строят в полулогарифмических координатах. По логарифмической оси абсцисс откладывают значения активности фактора X, по оси ординат – время свертывания соответствующих разведений стандарта. Активность фактора X для каждого разведения испытуемого образца находят по калибровочному графику. Активность фактора X (А ) в исследуемом образце рассчитывают по формуле:

— активность соответствующего разведения исследуемого образца, найденная по калибровочному графику;

k — разведение исследуемого образца.

1. Хромогенный метод

Фактор X активируют с помощью полученного из змеиного яда FX-активатора. Активированный фактор X (FXa) селективно расщепляет хромогенный субстрат FXa-1 N-α-бензилоксикарбонил-D-аргинил-L-глицил-L-аргинин-4-нитроанилида дигидрохлорид, N-бензоил-L-изолейцил-L-глутамил-глицил-L-аргинин-4-нитроанилида гидрохлорид, метансульфонил-D-лейцил-глицил-L-аргинин-4-нитроанилид, метоксикарбонил-D-циклогексилаланил-глицил-L-аргинин-4-нитроанилида ацетат с образованием п -нитроанилина. Образцы исследуют фотометрическим методом при 405 нм. Количество фактора X пропорционально увеличению оптической плотности раствора.

Определение фактора X хромогенным методом осуществляют с помощью специальных тестовых наборов. Анализ выполняется в соответствии с инструкцией к набору. Стандартный образец и препарат предварительно разводят плазмой, дефицитной по фактору X, до концентрации ~ 1 МЕ/мл (основное разведение). Из основного разведения готовят с помощью буферного раствора 3 разведения стандартного образца (в соответствии с инструкцией) и 3 разведения препарата. Каждое разведение стандартного образца определяют двухкратно, полученные значения используют для построения калибровочного графика. Испытуемые образцы определяют трехкратно.

Испытания проводят в ручном режиме с использованием пластиковых пробирок или микропланшет при температуре (37±0,5)°C или в автоматическом режиме с использованием коагулометра.

Для проведения испытаний в ручном режиме в лунки микропланшета вносят по 12,5 мкл каждого разведения испытуемого препарата или стандартного образца, в каждую лунку прибавляют по 25 мкл специфического активатора фактора Х из яда гадюки Рассела и инкубируют при температуре (37±0,5)°C в течение 90 с, после чего в каждую лунку вносят по 150 мкл рабочего разведения хромогенного субстрата фактора Х.

Определяют скорость изменения оптической плотности при длине волны 405 нм непрерывно в течение 3 мин и рассчитывают среднюю скорость изменения оптической плотности (∆А /мин) или измеряют оптическую плотность при длине волны 405 нм через последовательные интервалы времени (например, через 30 с) и строят график зависимости оптической плотности от времени и рассчитывают ∆А /мин как угол наклона прямой. Из значений ∆А /мин каждого индивидуального разведения стандартного образца и испытуемого препарата рассчитывают активность испытуемого препарата.

Фактор Виллебранда

Определение активности фактора Виллебранда проводят методом агглютинации или иммуноферментным методом.

Активность фактора Виллебранда определяется путем сравнения его активности с активностью стандартного образца.

Метод агглютинации

Метод основан на определении коферментной активности фактора Виллебранда при агглютинации суспензии тромбоцитов в присутствии ристоцетина А.

Испытание может проводиться количественными методами с использованием автоматизированного оборудования или полуколичественным методом путем визуальной оценки агглютинации в серии разведений.

Полуколичественный метод

Из стандартного образца и восстановленного раствора препарата готовят последовательные разведения в 0,9% растворе натрия хлорида с 1–5% раствором альбумина человека до ожидаемого содержания фактора Виллебранда 0,5, 1,0 и 2,0 МЕ/мл. По 0,05 мл каждого разведения стандартного образца и исследуемого препарата наносят на предметное стекло, добавляют по 0,1 мл суспензии тромбоцитов с ристоцетином и перемешивают в течение 1 мин. В качестве отрицательного контроля используют раствор разведения. После 1 мин инкубации при комнатной температуре визуально оценивают агглютинацию тромбоцитов. Максимальное разведение, при котором происходит агглютинация тромбоцитов, является титром ристоцетиновой коферментной активности образца.

Количественный метод

Готовят не менее 2 серий последовательных разведений стандартного и испытуемого образцов с помощью буфера для разведения до ожидаемого содержания фактора Виллебранда 0,5, 1,0 и 2,0 МЕ/мл.

Определение проводят в соответствии с инструкцией производителя автоматизированного оборудования. Получают значения зависимости изменения оптического поглощения (степени мутности раствора) от активности фактора Виллебранда.

Определение содержания фактора Виллебранда в испытуемом препарате осуществляют с использованием коэффициентов линейного уравнения зависимости оптической плотности раствора от содержания фактора Виллебранда в стандартном образце.

Иммуноферментный метод

Метод основан на определении коллаген-связывающей активности фактора Виллебранда. При специфическом связывании фактора Виллебранда с фибриллами коллагена и последующем связывании поликлональных антител к фактору Виллебранда, конъюгированных с ферментом, после добавления хромогенного субстрата образуется хромофор, который может быть количественно определен спектрофотометрическим методом. Существует линейная зависимость между связыванием коллагена с фактором Виллебранда и оптической плотностью.

Определение проводят с использованием тест-систем, разрешенных к применению в практике здравоохранения России в соответствии с инструкциями по применению.

Для испытаний готовят не менее 3 последовательных серий разведений стандартного и испытуемого образцов с помощью буфера для разведения до ожидаемого содержания фактора Виллебранда 1,0 МЕ/мл. Далее проводят испытания в соответствии с инструкцией производителя используемой тест-системы.

Активированные факторы свертывания крови

Определение проводят коагулометрическим методом.

Для испытаний готовят восстановленный раствор препарата. При наличии в препарате гепарина его нейтрализуют добавлением протамина сульфата из расчета 10 мкг протамина сульфата на 1 МЕ гепарина. Готовят разведения препарата 1:10 и 1:100 с помошью трис-буферного раствора рН 7,5.

В 3 пробирки вносят по 0,1 мл стандартной плазмы человека и по 0,1 мл раствора фосфолипидов, помещают в водяную баню с температурой (37±0,5)°C на 60 с, после чего в первую пробирку добавляют 0,1 мл трис-буферного раствора (контрольная проба), во вторую — 0,1 мл испытуемого препарата в разведении 1:10, в третью пробирку — 0,1 мл испытуемого препарата в разведении 1:100. Далее к содержимому каждой пробирки немедленно добавляют по 0,1 мл нагретого до температуры 37 о С раствора кальция хлорида 3,7 г/л. Отмечают время формирования сгустка от момента добавления раствора кальция хлорида.

Критерием приемлемости результатов является время коагуляции в контрольной пробе в интервале от 200 до 350 с.

Специфическая удельная активность

Специфическую активность факторов свертывания рассчитывают по формуле:

Определение активности антитромбина III

Хромогенный метод

Метод определения активности ATIII основан на его способности нейтрализовать тромбин в присутствии гепарина. К образцу, содержащему ATIII, добавляют избыточные количества гепарина и тромбина. Образующийся комплекс ATIII-гепарин нейтрализует количество тромбина, пропорциональное количеству ATIII. Оставшийся тромбин селективно расщепляет хромогенный субстрат с образованием п -нитроанилина, абсорбцию которого определяют при 405 нм. Таким образом, количество ATIII обратно пропорционально величине поглощения свободного п -нитроанилина в образце.

Определение активности ATIII проводят с помощью коммерческих тестовых систем. Для построения калибровочного графика используют стандартный образец ATIII или плазму-калибратор, аттестованную по международному стандарту. Стандартный образец или плазму-калибратор растворяют в дистиллированной воде согласно указаниям в инструкции. Зависимость величины оптической плотности от активности ATIII линейна в интервале активности ATIII от 0,1 до 1,0 МЕ/мл. Используя буфер с гепарином, готовят 4 разведения стандартного образца или плазмы-калибратора с активностью ATIII от 0,1 до 1,0 МЕ/мл. Анализ проводят при температуре 37°С согласно схеме, приведенной в инструкции к набору. Для каждого разведения трижды определяют величину оптической плотности при 405 нм и в линейных координатах строят калибровочный график зависимости абсорбции от активности ATIII.

Готовят 2 разведения исследуемого образца с ориентировочной активностью ATIII менее 1,0 МЕ/мл. Определение активности ATIII в испытуемых образцах проводят при температуре 37°С согласно указаниям в инструкции к набору. Активность ATIII в испытуемых разведениях находят по калибровочному графику. Активность ATIII в исследуемом образце определяют как:

A x – активность ATIII в соответствующем разведении;

k – разведение образца.

Количественное определение гепарина

1. Клоттинговый метод

Метод основан на способности гепарина за счет ингибирования ряда факторов удлинять время свертывания нормальной плазмы.

Для проведения анализа используют нормальную человеческую плазму, стандартный образец гепарина, АЧТВ-реагент и раствор хлористого кальция 0,025М. В качестве разбавителя стандартного и испытуемых образцов используют 0,9% раствор натрия хлорида. Стандартный образец гепарина растворяют в дистиллированной воде согласно указаниям в инструкции. Готовят 3 разведения стандартного образца с активностью гепарина 0,3, 0,4 и 0,5 МЕ/мл. Образцы стандарта с данными активностями должны удлинять время свертывания нормальной плазмы минимум в 1,5 раза, в противном случае следует использовать разведения с большей активностью гепарина. Параллельно готовят 3 разведения исследуемого образца таким образом, чтобы ориентировочно активность гепарина в данных разведениях попадала в интервал активности гепарина в разведениях стандартного образца.

Анализ проводят с помощью автоматического или полуавтоматического коагулометра в пластиковых пробирках при температуре 37°С. В пробирку вносят 100 мкл нормальной человеческой плазмы, 100 мкл разведения стандартного или исследуемого образца или 100 мкл 0,9% раствора натрия хлорида (холостой опыт), добавляют по 100 мкл АЧТВ-реагента и инкубируют смесь в течение 120 – 240 с при температуре (37±0,1)°С. Затем в пробирку вносят 100 мкл предварительно прогретого до температуры 37°С 0,025М раствора кальция хлорида и фиксируют время свертывания образца. В зависимости от техники постановки анализа объемы реагентов могут быть изменены с соблюдением пропорции. Время свертывания нормальной плазмы (холостой опыт) должно составлять 25 – 40 с. Для каждого разведения стандартного и исследуемого образцов время свертывания определяют трижды.

1. Хромогенный метод

Метод основан на расщеплении хромогенного субстрата, специфического для активированного фактора Х (FXa). При внесении в образец, содержащий гепарин, избыточных количеств ATIII и FXa происходит ингибирование количества FXа, пропорционального количеству гепарина. Оставшийся FXa отщепляет от специфического хромогенного субстрата п -нитроанилин, абсорбцию которого определяют при 405 нм. Таким образом, величина абсорбции обратно пропорциональна количеству гепарина. Данным методом определяют содержание как нефракционированного, так и низкомолекулярного гепарина в анти-Xa единицах.

Количество гепарина хромогенным методом определяют с помощью коммерческих тестовых систем. Для построения калибровочного графика используют стандартный образец гепарина или плазму-калибратор, аттестованную по международному стандарту. Стандартный образец или плазму-калибратор разводят в дистиллированной воде согласно инструкции. Готовят 4 разведения стандартного образца с концентрацией гепарина менее 1 анти-Xa ед/мл, используя буфер для разведения pH 8,4. Анализ проводят при температуре 37°С в соответствии с инструкцией к набору. Для каждого разведения трижды определяют абсорбцию при 405 нм, после чего в линейных координатах строят калибровочный график зависимости величины поглощения от концентрации гепарина. Зависимость линейна в диапазоне концентраций гепарина 0 – 1,0 анти-Xa ед/мл.

Для исследуемого образца готовят 2 разведения с концентрацией гепарина менее 1 анти-Xa ед/мл. Анализ проводят согласно инструкции к набору при температуре 37°С. Для каждого разведения величину абсорбции определяют трижды.

Определение проводят в ручном режиме с использованием пластиковых пробирок, микропланшет или в автоматическом режиме с использованием коагулометра.

Для проведения испытаний в ручном режиме в лунки микропланшета вносят по 20 мкл стандартной плазмы человека и 20 мкл раствора антитромбина III. Далее в эти лунки вносят соответственно по 20 , 60 , 100 и 140 мкл испытуемого или стандартного препарата и доводят объем раствора в каждой лунке до 200 мкл буфером (активность гепарина в конечной реакционной смеси 0,02 — 0,08 ME/мл).

По 40 мкл из каждой лунки планшета переносят во вторую серию лунок, в которые добавляют по 20 мкл раствора бычьего фактора Ха и инкубируют при температуре (37±0,5)°C в течение 30 с, после чего в лунки добавляют по 40 мкл раствора хромогенного субстрата фактора Ха и вновь инкубируют при температуре (37 ± 0,5)°C в течение 3 – 15 мин, измеряя скорость расщепления субстрата путем постоянного измерения оптической плотности при длине волны 405 нм (кинетический режим) или после остановки реакции добавлением 20% (об/об) раствора уксусной кислоты ледяной (конечная точка определения).

При проведении исследований в автоматическом режиме с использованием коагулометра получают значения зависимости изменения оптической плотности от концентрации гепарина.

Фактор VIII - антигемофильный глобулин А, или плазменный тромбопластический фактор А,- относится к сложным гликопротеидам. Доказан синтез фактора VIII в печени, селезенке, клетках эндотелия, лейкоцитах, почках. Антигемофильный глобулин А быстро инактивируется при 200 и 370С. Он стабилен несколько часов при +40С и несколько недель при -200С. Быстро исчезает из консервированной крови. Фактор VIII дольше активен в присутствии цитрата натрия при pH 6,2-6,9, но быстро теряет активность в среде ЭДТА. Он не адсорбируется на сульфате бария и гидроокиси алюминия. Этим пользуются для отделения фактора VIII от факторов II, VII, IX и Х. В крови этот фактор циркулирует в виде комплекса из трех субъединиц, обозначаемых VIIIk (коагулирующая единица), VIII-АГ (основной антигенный маркер) и VIII-фВ (фактор Виллебранда, связанный с VIII-АГ). VIII-фВ регулирует синтез коагулянтной части антигемофильного глобулина - VIIIk.

При свертывании крови фактор VIII остается в неактивном состоянии.

Почему важно делать фактора свертывания VIII?

Одним из наиболее распространенных тяжелых наследственных заболеваний является гемофилия, частота которой в нашей стране составляет 1 на 8-10 тыс. мужского населения. Заболевание характеризуется спонтанными, нередко смертельными кровотечениями, кровоизлияниями в суставы, ведущими к ранней инвалидности. Эти больные в течение всей жизни нуждаются в заместительной терапии препаратами плазмы. Основным в патогенезе гемофилии является нарушение 1 фазы свертывания крови, связанное с дефицитом ф.VIII (гемофилия А), ф.IX (гемофилия В), ф.XI (гемофилия С). Уже при снижении дефицитного фактора до 30% (норма 50-150%) заболевание проявляется в скрытой форме и обнаруживается после оперативных вмешательств в виде профузных кровотечений. Очевидно, что для достоверной диагностики гемофилии и при лечении больных чрезвычайно большое значение приобретает метод определения активности дефицитного фактора в плазме крови пациентом.

Гемофилия тяжелой степени. Уровень ф.VIII или IX менее 1%. Кровоизлияния в суставы, мышцы и другие органы случаются при минимальных или даже незаметных повреждениях.

Гемофилия средней степени. Уровень ф.VIII или IX между 1-5%. Кровотечения возникают из-за явных незначительных повреждений, также после различных операций и удалений зубов.

Гемофилия легкой степени. Уровень ф.VIII или IX между 6-30%. Кровоизлияния обычно следуют только за крупными повреждениями, хирургическими операциями или удалением зубов. Диагностика такой формы может быть не сделана до взрослого возраста или до проявления кровотечений после указанных ситуаций.

Осуществляется в основном белками, называемыми плазменными факторами свертывания крови. Плазменные факторы свертывания крови – это прокоагулянты, активация и взаимодействие которых приводят к образованию сгустка фибрина.

По Международной номенклатуре плазменные факторы свертывания крови обозначаются римскими цифрами, за исключением факторов Виллебранда, Флетчера и Фитцджеральда. Для обозначения активированного фактора к этим цифрам добавляется буква «а». Помимо цифрового обозначения, используют и другие наименования факторов свертывания – по их функции (например, фактор VIII – антигемофильный глобулин), по фамилиям больных с впервые обнаруженным дефицитом того или иного фактора (фактор XII – фактор Хагемана, фактор X – фактор Стюарта-Прауэра), реже – по фамилиям авторов (например, фактор Виллебранда).

Ниже приведены основные факторы свертывания крови и их синонимы по международной номенклатуре и основные их свойства в соответствии с данными литературы и специальных исследований.

Фибриноген (фактор I)

Фибриноген синтезируется в печени и клетках ретикулоэндотелиальной системы (в костном мозге, селезенке, лимфатических узлах и т. д.). В легких под действием особого фермента – фибриногеназы или фибринодеструктазы – происходит разрушение фибриногена. Содержание фибриногена в плазме 2 – 4 г/л, период полураспада – 72 – 120 часов. Минимальный уровень, необходимый для гемостаза составляет 0,8 г/л.

Под влиянием тромбина фибриноген превращается в фибрин, который образует сетчатую основу тромба, закупоривающего поврежденный сосуд.

Протромбин (фактор II)

Протромбин синтезируется в печени при участии витамина K. Содержание протромбина в плазме – около 0,1 г/л, период полураспада – 48 – 96 часов.

Уровень протромбина, или его функциональная полноценность, снижается при эндогенной или экзогенной недостаточности витамина K, когда образуется неполноценный протромбин. Скорость свертывания крови нарушается лишь при концентрации протромбина ниже 40% от нормы

В естественных условиях при свертывании крови под действием и , а также при участии факторов V и Xа (активированного фактора X), объединяемых общим термином «протромбиназа», протромбин превращается в тромбин. Процесс превращения протромбина в тромбин довольно сложен, так как во время реакции образуется ряд дериватов протромбина, аутопротромбинов и, наконец, различных типов тромбина (тромбина C, тромбина E), которые обладают прокоагулянтной, антикоагулянтной и фибринолитической активностью. Образующийся тромбин C - основной продукт реакции – способствует свертыванию фибриногена.

Тканевой тромбопластин (фактор III)

Тканевой тромбопластин представляет собой термостабильный липопротеид, имеется в различных органах – в легких, мозге, почках, сердце, печени, скелетных мышцах. В тканях содержится не в активном состоянии, а в виде предшественника – протромбопластина. Тканевой тромбопластин при взаимодействии с плазменными факторами (VII, IV) способен активировать фактор X, участвует во внешнем пути формирования протромбиназы – комплекса факторов, превращающих в тромбин.

Ионы кальция (фактор IV)

Ионы кальция участвуют во всех трех фазах свертывания крови: в активации протромбиназы (I фаза), превращении протромбина в тромбин (II фаза) и фибриногена в фибрин (III фаза). Кальций способен связывать гепарин, благодаря чему свертывание крови ускоряется. При отсутствии кальция нарушаются агрегация тромбоцитов и ретракция кровяного сгустка. Ионы кальция ингибируют фибринолиз.

Проакцелерин (фактор V)

Проакцелерин (фактор V, плазменный AC-глобулин или лабильный фактор) образуется в печени, но, в отличие от других печеночных факторов протромбинового комплекса (II, VII, и X) не зависит от витамина K. Легко разрушается. Содержание фактора V в плазме – 12 – 17 ед/мл (около 0,01 г/л), период полураспада – 15 – 18 часов. Минимальный уровень, необходимый для гемостаза – 10 – 15%.

Проакцелерин необходим для образования внутренней (кровяной) протромбиназы (активирует фактор X) и для превращения протромбина в тромбин.

Акцелерин (фактор VI)

Акцелерин (фактор VI или сывороточный AC-глобулин) – активная форма фактора V. Исключен из номенклатуры факторов свертывания, признается лишь неактивная форма фермента – фактор V (проакцелерин), который при появлении следов тромбина переходит в активную форму.

Проконвертин, конвертин (фактор VII)

Проконвертин синтезируется в печени при участии витамина K. Долго остается в стабилизированной крови, активируется смачиваемой поверхностью. Содержание фактора VII в плазме - около 0,005 г/л, период полураспада – 4 – 6 часов. Минимальный уровень, необходимый для гемостаза – 5 – 10%.

Конвертин – активная форма фактора – играет основную роль в образовании тканевой протромбиназы и в превращении протромбина в тромбин. Активация VII фактора происходит в самом начале цепной реакции при контакте с чужеродной поверхностью. В процессе свертывания проконвертин не потребляется и сохраняется в сыворотке.

Антигемофильный глобулин А (фактор VIII)

Антигемофильный глобулин А вырабатывается в печени, селезенке, клетках эндотелия, лейкоцитах, почках. Содержание фактора VIII в плазме - 0,01 – 0,02 г/л, период полураспада – 7 – 8 часов. Минимальный уровень, необходимый для гемостаза – 30 – 35%.

Антигемофильный глобулин А участвует во «внутреннем» пути формирования протромбиназы, усиливая активирующее действие фактора IXа (активированного фактора IX) на фактор X. Фактор VIII циркулирует в крови, будучи связанным с .

Антигемофильный глобулин B (фактор Кристмаса, фактор IX)

Антигемофильный глобулин B (фактор Кристмаса, фактор IX) образуется в печени при участии витамина K, термостабилен, длительно сохраняется в плазме и сыворотке крови. Содержание фактора IX в плазме составляет около 0,003 г/л. Период полураспада – 7 – 8 часов. Минимальный уровень, необходимый для гемостаза – 20 – 30%.

Антигемофильный глобулин B участвует во «внутреннем» пути формирования протромбиназы, активируя в комплексе с фактором VIII, ионами кальция и фактором 3 тромбоцитов фактор X.

Фактор Стюарта-Прауэра (фактор X)

Фактор Стюарта-Прауэра вырабатывается в печени в неактивном состоянии, активируется трипсином и ферментом из яда гадюки. K-витаминозависим, относительно стабилен, период полураспада – 30 – 70 часов. Содержание фактора X в плазме составляет около 0,01 г/л. Минимальный уровень, необходимый для гемостаза – 10 – 20%.

Фактор Стюарта-Прауэра (фактор X) участвует в образовании протромбиназы. В современной схеме свертывания крови активный фактор X (Xа) является центральным фактором протромбиназы, превращающей протромбин в тромбин. В активную форму фактор X превращается под действием факторов VII и III (внешний, тканевой, путь образования протромбиназы) или фактора IXа вместе с VIIIа и фосфолипидом при участии ионов кальция (внутренний, кровяной, путь образования протромбиназы).

Плазменный предшественник тромбопластина (фактор XI)

Плазменный предшественник тромбопластина (фактор XI, фактор Розенталя, антигемофильный фактор C) синтезируется в печени, термолабилен. Содержание фактора XI в плазме – около 0,005 г/л, период полураспада – 30 – 70 часов.

Активная форма этого фактора (XIа) образуется при участии факторов XIIа, и . Форма XIа активирует фактор IX, который превращается в фактор IXа.

Фактор Хагемана (фактор XII, фактор контакта)

Фактор Хагемана (фактор XII, фактор контакта) синтезируется в печени, вырабатывается в неактивном состоянии, период полураспада – 50 – 70 часов. Содержание фактора в плазме составляет около 0,03 г/л. Кровоточивость не возникает даже при очень глубоком дефиците фактора (менее 1%).

Активируется при соприкосновении с поверхностью кварца, стекла, целлита, асбеста, карбоната бария, а в организме – при контакте с кожей, волокнами коллагена, хондроитинсерной кислотой, мицеллами насыщенных жирных кислот. Активаторами фактора XII являются также фактор Флетчера, калликреин, фактор XIа, плазмин .

Фактор Хагемана участвует во «внутреннем» пути формирования протромбиназы, активируя фактор XI.

Фибринстабилизирующий фактор (фактор XIII, фибриназа, плазменная трансглутаминаза)

Фибринстабилизирующий фактор (фактор XIII, фибриназа, плазменная трансглутаминаза) определяется в сосудистой стенке, тромбоцитах, эритроцитах, почках, легких, мышцах, плаценте. В плазме находится в виде профермента, соединенного с фибриногеном. В активную форму превращается под влиянием тромбина. В плазме содержится в количестве 0,01 – 0,02 г/л, период полураспада – 72 часа. Минимальный уровень, необходимый для гемостаза – 2 – 5%.

Фибринстабилизирующий фактор участвует в формировании плотного сгустка. Оказывает также влияние на адгезивность и агрегацию кровяных пластинок.

Фактор Виллебранда (антигеморрагический сосудистый фактор)

Фактор Виллебранда (антигеморрагический сосудистый фактор) синтезируется эндотелием сосудов и мегакариоцитами, содержится в плазме и в тромбоцитах.

Фактор Виллебранда служит внутрисосудистым белком-носителем для фактора VIII. Связывание фактора Виллебранда с фактором VIII стабилизирует молекулу последнего, увеличивает период ее полусуществования внутри сосуда и способствует ее транспорту к месту повреждения. Другая физиологическая роль связи фактора VIII и фактора Виллебранда заключается в способности фактора Виллебранда повышать концентрацию фактора VIII в месте повреждения сосуда. Поскольку циркулирующий фактор Виллебранда связывается как с обнаженными субэндотелиальными тканями, так и со стимулированными тромбоцитами, он направляет фактор VIII в зону поражения, где последний необходим для активации фактора X при участии фактора IXa.

Фактор Флетчера (плазменный прекалликреин)

Фактор Флетчера (плазменный прекалликреин) синтезируется в печени. Содержание фактора в плазме составляет около 0,05 г/л. Кровоточивость не возникает даже при очень глубоком дефиците фактора (менее 1%).

Участвует в активации факторов XII и IX, плазминогена , переводит кининоген в кинин.

Фактор Фитцджеральда (плазменный кининоген, фактор Фложека, фактор Вильямса)

Фактор Фитцджеральда (плазменный кининоген, фактор Фложека, фактор Вильямса) синтезируется в печени. Содержание фактора в плазме составляет около 0,06 г/л. Кровоточивость не возникает даже при очень глубоком дефиците фактора (менее 1%).

Участвует в активации фактора XII и плазминогена.

Литература:

• Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, "Медицина", 1975 г.
• Баркаган З. С. Геморрагические заболевания и синдромы. – Москва: Медицина, 1988 г.
• Грицюк А. И., Амосова Е. Н., Грицюк И. А. Практическая гемостазиология. – Киев: Здоровье, 1994 г.
• Шиффман Ф. Дж. Патофизиология крови. Перевод с английского – Москва – Санкт-Петербург: «Издательство БИНОМ» – «Невский Диалект», 2000 г.
• Справочник "Лабораторные методы исследования в клинике" под ред. проф. В. В. Меньшикова. Москва, "Медицина", 1987 г.
• Исследование системы крови в клинической практике. Под ред. Г. И. Козинца и В. А. Макарова. - Москва: Триада-Х, 1997 г.

Фактор VIII (антигемофильный фактор А) представляет собой белок плазмы, необходимый для правильного свертывания крови. В плазме присутствует в комплексе с фактором фон Виллебранда (ФВ). Фактор VIII является неферментативным кофактором во внутреннем механизме системы свертывания крови, который в присутствии фосфолипидов и ионов кальция ускоряет активацию фактора X фактором IXa. Гемофилия А, являющаяся рецессивно наследуемым, сцепленным с полом заболеванием, характеризуется врожденным дефицитом фактора VIII. T1/2 фактора VIII составляет 8-12 ч. Фактор фон Виллебранда, с одной стороны защищает фактор VIII от протеолитической деградации, с другой стороны, участвует в адгезии тромбоцитов, образуя мостик между субэндотелиальным слоем кровеносных сосудов и тромбоцитами. Дефицит этого фактора является причиной болезни фон Виллебранда. После применения фактора VIII происходит увеличение прокоагулянтной активности фактора VIII в плазме, что на время может корректировать нарушения свертываемости крови у больных, страдающих гемофилией А. Фактор VIII получают из пула плазмы крови нескольких доноров после предварительного исследования на носительство HBsAg, наличие антител к HCV и к HIV. При изготовлении концентрата фактора VIII используются различные методы (например, термоинактивация, химические методы) для того, чтобы инактивировать вирусы и снизить риск передачи инфекционных заболеваний. Фактор VIII также получают с использованием методов генной инженерии.

Показания

Профилактика и лечение нарушений свертывания крови вследствие врожденной (гемофилия А) или приобретенной недостаточности фактора VIII. Болезнь фон Виллебранда (препараты, содержащие фактор VIII и фактор фон Виллебранда) с дефицитом фактора VIII.

Противопоказания

Повышенная чувствительность к любому из компонентов препарата или к животным белкам, например, мышей, крупного рогатого скота, или хомячков (в зависимости от препарата). В случае развития аллергической или анафилактической реакции применение необходимо немедленно прекратить. У пациентов, придерживающихся диеты с низким содержанием натрия, необходимо учитывать содержание натрия в препаратах. При применении терапии с использованием препаратов на основе крови или плазмы человека, не может быть полностью исключена возможность передачи инфекционных агентов. Это также касается неизвестных или недавно открытых вирусов и других патогенов. У пациентов с болезнью фон Виллебранда существует риск развития тромботических осложнений; следует контролировать состояние пациентов с факторами риска для выявления ранних признаков тромбоза.

Лекарственное взаимодействие

Данные отсутствуют. Препараты не следует смешивать с другими фармацевтическими средствами.

Нежелательные эффекты

Часто: озноб. Реже: тошнота, резкое покраснение кожи лица, небольшая усталость, сыпь, кровоподтеки, потливость, дрожь, тремор, лихорадка, боль в ногах, холод в конечностях, боль в горле и гортани, воспаление уха, аномальные результаты тестов на остроту слуха, кровотечения из носа, бледность, аллергические реакции (крапивница, сыпь, одышка, кашель, чувство стеснения в груди, одышка, гипотония, анафилаксия). Кроме того: цианоз, тахикардия, рвота, дискомфорт в брюшной полости, обмороки, шелушение кожи. У 15-30% больных, страдающих тяжелой гемофилией А, вырабатывается ингибитор фактора VIII, особенно в первые 20 дней терапии.

Беременность и лактация

Способ применения и дозы

Внутривенно. Индивидуальная доза зависит от тяжести заболевания, локализации и обширности кровотечения, а также от клинического состояния пациента. Рекомендуется контролировать частоту сердечных сокращений перед введением препарата и во время его введения - в случае увеличения частоты сердечных сокращений необходимо снизить скорость введения препарата или на мгновение приостановить его. Гемофилия А. Расчет дозы (МЕ): масса тела (кг) х желаемая концентрация фактора VIII (% от нормы) × 0,5. При ранних кровоизлияниях в суставы и мышцы или кровотечениях изо рта необходимо поддерживать активность фактора VIII на уровне 20-40% от обычного (МЕ/дл), вводить препарат в течение 1-3 дней через каждые 12-24 ч до момента прекращения болей или заживления раны. При более тяжелых кровоизлияниях в сустав, мышцы, или в случае гематомы необходимо поддерживать активность фактора VIII на уровне 30-60% от нормы (МЕ/дл), вводить препарат в течение 3 дней или дольше через каждые 12-24 ч, до прекращения болей и устранения проблемы. При тяжелых, угрожающих жизни кровотечениях необходимо поддерживать активность фактора VIII на уровне 60-100% от нормы, вводить препарат через каждые 8-24 ч до момента устранения угрозы. Малые хирургические вмешательства, в том числе удаление зубов - поддерживать активность фактора VIII на уровне 30-60% от нормы (МЕ/дл), вводить каждые 24 часа до момента заживления раны, по крайней мере, через день. Большие хирургические вмешательства – поддерживать активность фактора VIII на уровне 80-100% от нормы (МЕ/дл) до и после операции, вводить до момента заживления раны через каждые 8-24 ч, а затем продолжать терапию в течение не менее 7 дней, поддерживая активность фактора VIII на уровне 30-60% от нормы (МЕ/дл). Профилактическое поддерживающая терапия - обычно 20-40 МЕ/кг массы тела раз в 2-3 дня; у некоторых пациентов, особенно у детей, может возникнуть необходимость в применении более высоких доз или более коротких интервалов между введением инъекций. Необходимо контролировать состояние пациентов на предмет появления у них ингибиторов фактора VIII, рекомендуется выполнять соответствующие лабораторные исследования, в том числе для определения активности антигемофильного фактора (AHF). Если ожидаемого активность AHF в плазме не достигнута, или если кровотечение не прекратилось, несмотря на применение необходимой дозы, следует провести анализ на наличие ингибитора фактора VIII. Если титр ингибитора составляет > 10 БЕ/мл, терапия с применением фактора VIII может быть неэффективной, поэтому необходимо рассмотреть вопрос применения других методов лечения. Болезнь фон Виллебранда. Как правило, 1 МЕ / кг фактора фон Виллебранда (vWf) повышает концентрацию в плазме фактора фон Виллебранда на 0,02 МЕ/мл (2%). Рекомендуемая для достижения концентрация фактора фон Виллебранда составляет > 0,6 МЕ/мл (60%), а фактора VIII> 0,4 МЕ/мл (40%). Как правило, для получения гемостаза рекомендуемая концентрация составляет 40-80 МЕ фактора фон Виллебранда / кг массы тела и 20-40 МЕ фактора VIII / кг массы. Может возникнуть необходимость во введении начальной дозы 80 МЕ / кг м.т. фактора фон Виллебранда, особенно у больных, страдающих третьим типом болезни фон Виллебранда, при котором для обеспечения необходимого уровня может потребоваться применение более высоких доз, чем при других типах БВ. Для профилактики сильных кровотечений во время операции или после нее введение препарата необходимо начинать за 1-2 часа до операции, а затем повторно вводить определенную дозу через каждые 12-24 ч. Доза и длительность лечения зависит от клинического состояния пациента, типа и интенсивности кровотечения, а также от концентрации фактора фон Виллебранда и фактора VIII. В случае применения препаратов с фактором фон Виллебранда, содержащих фактор VIII, длительное лечение может привести к чрезмерному увеличению концентрации фактора VIII. По истечении 24-48 часов терапии, для предотвращения неконтролируемого повышения концентрации фактора VIII, следует рассмотреть необходимость снижения дозы и/или увеличения интервала между введением доз препарата. В случае болезни фон Виллебранда с дефицитом фактора VIII профилактика и лечение кровотечений основывается на рекомендациях, касающихся применения при гемофилии А.

Формула, химическое название: нет данных.
Фармакологическая группа: гематотропные средства/ Коагулянты (в том числе факторы свертывания крови), гемостатики.
Фармакологическое действие: гемостатическое, восполняющее дефицит фактора свертывания VIII.

Фармакологические свойства

Фактор свертывания крови VIII является гемостатическим лекарственным средством, которое используется при гемофилии A. Фактор свертывания крови VIII ускоряет переход протромбина в тромбин и, таким образом, способствует формированию фибринового сгустка. При введении больным с гемофилией фактор свертывания крови VIII связывается с фактором Виллебранда в сосудах. Активированный фактор свертывания крови VIII воздействует как кофактор для активированного фактора IX, ускоряя преобразование фактора X в активированный фактор X. Активированный фактор X, в свою очередь, преобразует протромбин в тромбин. Далее тромбин превращает фибриноген в фибрин, и при этом уже может образоваться сгусток. Гемофилия A - это наследственное, связанное с полом нарушение свертывания крови, которое вызывается уменьшением уровня фактора свертывания крови VIII, приводит к профузным кровотечениям в мышцы, суставы, внутренние органы и может быть как спонтанным, так и в результате хирургических вмешательств или случайных травм. При проведении заместительного лечения уровень фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови возрастает, что позволяет временно восполнить недостаточность фактора свертывания крови VIII и снизить склонность к кровотечениям. Удельная активность фактора свертывания крови VIII составляет не менее 100 МЕ/мг общего белка.
Фактор свертывания крови VIII является обычным компонентом сыворотки крови человека и оказывает такое же действие, как и эндогенный фактор свертывания крови VIII. После введения фактора свертывания крови VIII приблизительно от 2/3 до 3/4 лекарственного препарата остается в кровотоке. Уровень активности фактора свертывания крови VIII, который достигается в сыворотке крови, должен составлять 80 - 120 % от ожидаемой активности фактора свертывания крови VIII. Активность фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови уменьшается соответственно модели двухфазного экспоненциального убывания. В первой фазе происходит распределение фактора свертывания крови VIII между внутрисосудистыми и прочими жидкостями организма с периодом полувыведения 3 - 6 часов. Во второй, более медленной фазе, которая, скорее всего, отражает потребление фактора свертывания крови VIII, период полувыведения составляет в среднем 12 часов (от 8 до 20 часов). Что соответствует истинному биологическому периоду полувыведения фактора свертывания крови VIII. У пациентов с гемофилией A средние значения фармакокинетических показателей фактора свертывания крови VIII составляют: восстановление - 2,4 % × МЕ^-1 × кг; площадь под фармакокинетической кривой концентрация - время кривой - от 33,4 до 45,5 % × ч × МЕ^-1 × кг; среднее время нахождения в крови - от 16,6 до 19,6 часов; период полувыведения - от 12,6 до 14,3 часов; клиренс - от 2,6 до 3,2 мл × ч^-1 × кг.

Показания

Терапия и профилактика кровотечений у пациентов с врожденной гемофилией A или приобретенной недостаточностью фактора свертывания крови VIII, включая ингибиторные формы (с применением метода индукции иммунной толерантности).

Способ применения фактора свертывания крови VIII и дозы

Фактор свертывания крови VIII вводится внутривенно, после разведения в воде для инъекций. Доза и продолжительность заместительного лечения зависит от степени тяжести недостаточности фактора свертывания крови VIII, локализации и продолжительности кровотечения, объективного состояния пациента. Лечение необходимо начинать под контролем врача, который имеет опыт терапии пациентов с гемофилией.
Количество единиц фактора свертывания крови VIII выражается в международных единицах (МЕ), которые установлены текущими стандартами Всемирной Организации Здравоохранения для фактора свертывания крови VIII. Активность фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови выражается в процентах (относительно нормального уровня фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови человека) или в МЕ (относительно международного стандарта для фактора свертывания крови VIII). 1 МЕ активности фактора свертывания крови VIII эквивалентна содержанию фактора свертывания крови VIII в 1 мл нормальной сыворотки крови человека. Расчет нужной дозы лекарственного препарата основан на эмпирических данных, по которым 1 МЕ фактора свертывания крови VIII на один кг массы тела увеличивает активность фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови на 1,5 - 2 % от нормальной активности. Для расчета нужной дозы лекарственного препарата определяют начальный уровень активности фактора свертывания крови VIII и насколько эту активность нужно увеличить. Необходимую дозу лекарственного препарата вычисляют по следующей формуле: необходимая доза = масса тела (кг) × желаемое увеличение уровня фактора свертывания крови VIII (%) (МЕ/дл) × 0,5. Частота использования и дозы лекарственного средства всегда должны быть направлены на достижение клинического эффекта в каждом конкретном случае. При кровотечениях после начала лечения активность фактора свертывания крови VIII не должна снижаться меньше начального уровня в сыворотке крови (% от нормальной концентрации) в соответствующий период времени.
При ранних гемартрозах, внутримышечных кровотечениях, кровотечениях ротовой полости необходимый уровень фактора свертывания крови VIII составляет 20 - 40 %, необходимы повторные введения лекарственного препарата каждые 12 - 24 часа не менее одних суток до утихания боли или заживления источника кровотечения. При более интенсивных кровотечениях, внутримышечных кровотечениях или гематомах необходимый уровень фактора свертывания крови VIII составляет 30 - 60 %, необходимы повторные введения лекарственного препарата каждые 12 - 24 часа в течение 3 - 4 дней до утихания боли и восстановления трудоспособности. При угрожающих жизни кровотечениях необходимый уровень фактора свертывания крови VIII составляет 60 - 100 %, необходимы повторные введения лекарственного препарата каждые 8 - 24 часа до полного исчезновения угрозы. При малых хирургических вмешательствах, включая удаление зубов, необходимый уровень фактора свертывания крови VIII составляет 30 - 60 %, необходимо введение лекарственного препарата каждые 24 часа не менее одних суток до достижения заживления. При крупных хирургических вмешательствах необходимый уровень фактора свертывания крови VIII составляет 80 - 100 % (дооперационный и постоперационный), необходимы повторные введения лекарственного препарата каждые 8 - 24 часа до адекватного заживления раны, далее не менее одной недели для поддержания активности фактора свертывания крови VIII на уровне 30 - 60 %. Необходимую частоту использования и дозу лекарственного препарата устанавливает лечащий врач.
При проведении лечения следует оценивать уровень фактора свертывания крови VIII для коррекции дозы и частоты повторных инъекций лекарственного препарата. Необходимо тщательно контролировать активность фактора свертывания крови VIII в сыворотке крови, в особенности при крупных хирургических вмешательствах. Ответ на лечение у отдельных больных может отличаться, на что указывают различия в периоде полувыведения и степени восстановления активности фактора свертывания крови VIII.
Для продолжительной профилактики кровотечений у больных с тяжелой формой гемофилии A средняя доза фактора свертывания крови VIII составляет 20 - 40 МЕ/кг массы тела с интервалами в 2 - 3 дня. У некоторых больных, в особенности у пациентов молодого возраста, может возникнуть необходимость в сокращении интервала между введениями фактора свертывания крови VIII или же увеличение его дозы.
У некоторых больных после терапии лекарственным препаратом возможно формирование ингибиторов фактора свертывания крови VIII, что может оказать влияние на эффективность дальнейшей терапии. Если на фоне проводимой терапии не отмечается ожидаемого увеличения активности фактора свертывания крови VIII или нет требуемого гемостатического эффекта, то рекомендуется консультация в специализированном лечебном центре с применением теста Бетесда. Для элиминации ингибитора фактора свертывания крови VIII может быть применена индукция иммунной толерантности, которая заключается в ежедневном введении фактора свертывания крови VIII в концентрации, которая превышает блокирующую способность ингибитора (100 - 200 МЕ/кг/сутки в зависимости от титра ингибитора). Фактор свертывания крови VIII выполняет функцию антигена и провоцирует рост титра ингибитора фактора свертывания крови VIII до развития толерантности, то есть снижения и дальнейшего исчезновения ингибитора. Индукция иммунной толерантности проводится постоянно и продолжается в среднем от 10 до 18 месяцев. Индукция иммунной толерантности должна проводиться только врачами, которые являются специалистами в области антигемофильного лечения.
Клинические данные об использовании фактора свертывания крови VIII у ранее не леченых больных ограничены.
Клиническое исследование при участии 15 пациентов до 6 лет не выявило специальных требований для дозирования лекарственного препарата у детей.
Необходимо контролировать наличие ингибиторов фактора свертывания крови VIII у больных. Если на фоне проводимой терапии не отмечается ожидаемого увеличения активности фактора свертывания крови VIII или нет необходимого гемостатического эффекта, то необходимо провести анализ на наличие ингибиторов фактора свертывания крови VIII. Если у больных с высоким уровнем ингибиторов фактора свертывания крови VIII лечение лекарственным препаратом неэффективно, то необходимо рассмотреть вопрос об альтернативной терапии. Лечением данных больных должны заниматься врачи, которые имеют опыт терапии гемофилии.
Имеются промежуточные данные продолжающегося исследования при участии пациентов, которые проходят индукцию иммунной толерантности фактором свертывания крови VIII. Режим дозирования устанавливается в лечебном учреждении индивидуально для каждого больного. Больные со слабым ответом, как правило, получают фактор свертывания крови VIII в дозе 50 - 100 МЕ/кг массы тела каждый день или через день, больные с сильным ответом, как правило, получают фактор свертывания крови VIII в дозе 100 - 150 МЕ/кг массы тела каждые 12 часов. Титры ингибиторов фактора свертывания крови VIII определяют два раза в 7 дней в первые три месяца, затем титры ингибиторов фактора свертывания крови VIII определяют каждые три месяца во время плановых посещений лечебных учреждений для продолжения лечения. Результат индукции иммунной толерантности определяется через три года по трем последовательным критериям, в том числе негативный титр ингибиторов фактора свертывания крови VIII, восстановление активности фактора свертывания крови VIII, нормализация периода полувыведения фактора свертывания крови VIII. При промежуточном анализе установлено, что из 69 больных, которые получали фактор свертывания крови VIII в качестве индукции иммунной толерантности, 49 пациентов завершили исследование. У больных с успешной элиминацией ингибитора фактора свертывания крови VIII ежемесячная частота кровотечений значимо уменьшилась.
Перед внутривенным введением восстановленный лекарственный препарат необходимо осмотреть на изменение окраски и наличие механических включений. Восстановленный раствор фактора свертывания крови VIII должен быть прозрачным или слегка опалесцирующим. Нельзя использовать мутный раствор фактора свертывания крови VIII или при наличии сгустков в нем. Восстановленный раствор фактора свертывания крови VIII необходимо применять сразу же после приготовления и только один раз.
В качестве меры предосторожности следует контролировать частоту сердечных сокращений перед и во время введения фактора свертывания крови VIII. При выраженном учащении пульса введение фактора свертывания крови VIII необходимо замедлить или прекратить.
Любой неиспользованный раствор фактора свертывания крови VIII должен быть утилизирован согласно существующим правилам.
Как и при использовании любого лекарственного средства белкового происхождения, для внутривенного введения возможно развитие реакций повышенной чувствительности аллергического типа. Кроме фактора свертывания крови VIII лекарственный препарат содержит следовые количества других белков плазмы крови человека. Необходимо проинформировать больных о ранних признаках реакций повышенной чувствительности, включая генерализованную и местную крапивницу, свистящее дыхание, ощущение сдавления грудной клетки, гипотензию, анафилаксию. При развитии данных симптомов необходимо немедленно прекратить использование лекарственного препарата и обратиться к лечащему врачу. При развитии шока необходимо провести стандартное противошоковое лечение.
При применении фактора свертывания крови VIII в редких случаях отмечались реакции повышенной чувствительности или аллергические реакции, которые могут включать ощущение жжения в месте введения, ощущение покалывания в месте введения, ангионевротический отек, приливы крови к лицу, озноб, генерализованную крапивницу, местную крапивницу, головную боль, гипотензию, апатичность, тошноту, тахикардию, беспокойство, ощущение сдавления грудной клетки, рвоту, звон в ушах, свистящее дыхание, в некоторых случаях данные симптомы могут прогрессировать, в том числе, до развития тяжелой анафилаксии, включая шок.
У пациентов с гемофилией A при применении фактора свертывания крови VIII возможно появление ингибиторов (антител) фактора свертывания крови VIII, что проявляется недостаточным клиническим ответом на введение лекарственного препарата. В данной ситуации необходимо обратиться в специализированный гематологический центр. Образование нейтрализующих ингибиторов (антител) фактора свертывания крови VIII является известным осложнением лечения пациентов с гемофилией A. Обычно этими ингибиторами фактора свертывания крови VIII являются иммуноглобулины G, действие которых направлено против прокоагулянтной активности фактора свертывания крови VIII, их уровень определяют в единицах Бетесда на мл сыворотки крови с применением модифицированного метода. Риск формирования ингибиторов фактора свертывания крови VIII коррелирует с использованием лекарственного препарата и наиболее высок в первые 20 дней лечения. В редких случаях ингибиторы фактора свертывания крови VIII могут выявиться после первых 100 дней использования лекарственного препарата. Необходим тщательный контроль всех пациентов, которые получают лечение лекарственными препаратами фактора свертывания крови VIII, на предмет появления антител к фактору свертывания крови VIII путем проведения соответствующих лабораторных анализов и клинических наблюдений. В продолжающемся клиническом исследовании при участии ранее не леченых больных у 3 из 39 человек, которые получали фактор свертывания крови VIII по необходимости, появились ингибиторы фактора свертывания крови VIII. Два случая были клинически значимыми, у двух других пациентов ингибиторы фактора свертывания крови VIII спонтанно исчезли без изменения дозы лекарственного препарата. Все случаи образования ингибиторов фактора свертывания крови VIII отмечались при терапии по необходимости на протяжении не более 50 дней. Отмечался начальный уровень активности фактора свертывания крови VIII менее 1 % у 35 ранее не леченых больных и менее 2% у 4 ранее не леченых больных. К моменту промежуточного анализа фактор свертывания крови VIII использовали на протяжении не менее 20 дней у 34 больных и на протяжении не менее 50 дней у 30 больных. У ранее не леченых больных, которые применяли фактор свертывания крови VIII для профилактики, ингибиторы фактора свертывания крови VIII не определялись. Во время исследования 12 ранее не леченых больных подверглись 14 оперативным вмешательствам. Средний возраст больного на момент первого использования фактора свертывания крови VIII составил 7 месяцев (от 3 дней до 67 месяцев), а средняя длительность использования фактора свертывания крови VIII в клиническом исследовании составила 100 дней (от 1 до 553 дней).
Есть информация о наличии связи между образованием ингибиторов фактора свертывания крови VIII и аллергическими реакциями, поэтому при развитии аллергических реакций больной должен быть обследован на наличие ингибиторов фактора свертывания крови VIII. У пациентов с ингибиторами фактора свертывания крови VIII может быть повышен риск анафилаксии при последующем применении фактора свертывания крови VIII. Поэтому первое введение фактора свертывания крови VIII необходимо проводить по назначению лечащего врача под медицинским контролем в условиях, которые позволяют оказывать необходимую медицинскую помощь при развитии аллергических реакций.
Стандартные меры профилактики инфекционных заболеваний, которые могут быть вызваны использованием лекарственных средств, приготовленных из крови или сыворотки крови человека, включают отбор доноров, скрининг индивидуальных донаций и пулов сыворотки крови на специфические маркеры инфекционных заболеваний внедрение в производство лекарственных препаратов эффективных стадий инактивации и удаления микроорганизмов. Но при использовании лекарственных средств, которые приготовлены из крови или сыворотки крови человека, риск передачи микроорганизмов, которые вызывают инфекционные заболевания, не может быть полностью исключен. Также это относится к новым или неизвестным микроорганизмам. Данные меры профилактики инфекционных заболеваний считаются эффективными в отношении оболочечных вирусов (вирус иммунодефицита человека, вирус гепатита B, вирус гепатита C) и безоболочечного вируса гепатита A. Эти меры профилактики инфекционных заболеваний могут иметь ограниченную эффективность в отношении безоболочечных вирусов, например, парвовирус B19. Инфекционное заболевание, которое вызвано парвовирусом B19, может иметь серьезные последствия для женщин во время беременности (инфицирование плода) и пациентов с иммунодефицитом или усиленным эритропоэзом (например, при гемолитической анемии). У больных, которые регулярно и многократно получают лекарственные препараты фактора свертывания крови VIII, произведенные из сыворотки крови человека, необходимо рассмотреть вопрос о проведении соответствующей вакцинации против гепатитов A и B.
Для установления связи между больным и серией лекарственного средства рекомендуется каждый раз при использовании фактора свертывания крови VIII записывать название и номер серии лекарственного препарата.

При применении фактора свертывания крови VIII необходимо соблюдать осторожность при выполнении потенциально опасных видов деятельности, которые требуют повышенной концентрации внимания и быстроты психомоторных реакций (включая управление транспортными средствами, механизмами), так как возможно развитие головной боли, звона в ушах, гипотензии и других побочных реакций, которые могут оказать негативное влияние на выполнение указанных видов деятельности. При развитии таких побочных реакций необходимо отказаться от выполнения потенциально опасных видов деятельности, которые требуют повышенной концентрации внимания и быстроты психомоторных реакций (включая управление транспортными средствами, механизмами).

Противопоказания к применению

Гиперчувствительность (в том числе к вспомогательным компонентам лекарственного препарата).

Ограничения к применению

Беременность, кормление грудью.

Применение при беременности и кормлении грудью

Так как гемофилия A встречается у женщин редко, то опыт использования фактора свертывания крови VIII у женщин во время беременности и в период грудного вскармливания отсутствует. Фактор свертывания крови VIII у женщин во время беременности и в период грудного вскармливания следует применять только при наличии абсолютных показаний, когда ожидаемая польза для матери выше возможного риска для плода или ребенка.

Побочные действия фактора свертывания крови VIII

Нервная система, психика и органы чувств: головная боль, беспокойство, звон в ушах.
Сердечно-сосудистая система, кровь (гемостаз, кроветворение) и лимфатическая система: гипотензия, приливы крови к лицу, тахикардия.
Пищеварительная система: тошнота, рвота.
Дыхательная система: ощущение сдавления грудной клетки, свистящее дыхание.
Иммунная система: реакции гиперчувствительности, анафилактический шок, аллергические реакции, тяжелая анафилаксия, ангионевротический отек, генерализованная крапивница, местная крапивница.
Общие расстройства и реакции в месте введения: ощущение жжения в месте введения, ощущение покалывания в месте введения, озноб, апатия, повышение температуры тела.
Лабораторные показатели: образование антител к фактору свертывания крови VIII в сыворотке крови.

Взаимодействие фактора свертывания крови VIII с другими веществами

Нет данных о взаимодействии фактора свертывания крови VIII с другими лекарственными препаратами.
Не следует использовать другие лекарственные средства при введении фактора свертывания крови VIII.

Передозировка

Случаев передозировки фактором свертывания крови VIII зарегистрировано не было. Рекомендуется не превышать назначенную дозу фактора свертывания крови VIII.

Торговые названия препаратов с действующим веществом фактор свертывания крови VIII

Агемфил А
Антигемофильный фактор человека-М (AHF-M)
Бериате
Гемоктин
Гемофил М
Иммунат
Коэйт-ДВИ
Коэйт-ХП
Криобулин ТИМ 3
Криопреципитат
ЛонгЭйт
Октави
Октанат
Фанди
Хематэ П
Эмоклот Д.И.

Комбинированные препараты:
Фактор свертывания крови VIII + Фактор Виллебранда: Вилате, Гемате® П.